Analisis comparativo de mutaciones de genes ig vh6 de celulas plasmaticas humanas de amigdala, sangre y medula osea

Resumen

Las células plasmáticas (CP) son el estadio final de diferenciación B, y como tal son las responsables de la producción de los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig), que han sido finalmente seleccionados para la defensa humoral contra antígenos (Ag). Para cumplir esta función las Ig de las CP han sufrido en fases previas de su desarrollo una serie de alteraciones en su secuencia de los genes IgVH debidas al proceso de hipermutación somática (HMS) y posterior selección por Ag, lo que conduce a la mejora de la afinidad de las Igs. Modelos animales revelan que las CP iniciales se generan en los órganos linfoides pocos días después de la entrada de Ag. Después de ésta primera fase, el número de CP desciende drásticamente en estas áreas inductivas y algunas se desplazan a través de la circulación (SP) hasta tejidos de depósito final, como la médula ósea (MO).Se ha establecido que este camino madurativo incluye el incremento de HMS y mejora de la afinidad. Recientemente, se ha podido establecer en humanos que las CP no son homogéneas, observándose cambios fenotípicos y funcionales que sigeren un gradiente madurativo similar que se inicia en las CP tempranas de los órganos linfoides inductivos (agmidala, (A)), progresa en la fase circulante en sangre periférica (SP) y es máximo en CP de MO. Sin embargo, no se sabe si este gradiente madurativo se acompaña de cambios en los genes IgVh de las CP. En este trabajo se han obtenido CP humanas de A, SP y Mo altamente purificadas usando métodos inmuno-magnéticos y/o "sorting" de células CD38 ++. Se ha secuenciado el ADNc codific ante de la región IgVh6 (n=574) presentes en CP secretoras del Igm, iGg, e IgA procedentes de los tres territorios mencionados y provenientes de varios sujetos. Los resultados muestran que existen diferencias notables entre los territorios de CP en cuantos a las mutaciones somáticas (nº, localización en CDR vs FR, Nº de mutaciones reemplazantes R, etc.) presentes en los genes mencionados, produciéndose un aumento de éstas en dirección A-SP-MO.. Estos genes aparecen más mutados en los CDRs que en los FRs, de acuerdo con lo descrito. Además, la comparación entre las mutaciones presentes en los distintos isotipos revela gran cantidad de diferencias. El isotipo más mutado es IgG seguido de IgA e IgM. En las tres poblaciones la relacion R/S en CDR es claramente superior a la encontrada en FR, aunque en ambas regiones los valores observados de R/S son inferiores a los esperados is dependiera exclusivamente del azar. CDR1 presenta un mayor frecuencia de mutaciones de CDR2 pero un cociente R/S similar. El análisis realizado del cambio de aminoácidos (aa) reemplazados en CDR1 se mantiene constante a lo largo del gradiente de maduración, sin embargo, en CDR2 el porcentaje de cambio de aa no conservados aumenta en la dirección A-SP-Mo mostrando un progreso madurativo de las mutaciones hacia una mayor afinidad por el Ag. Estos datos por primera vez en humanos que la cantidad y calidad de las HMS en los genes IgVH de las CP es un claro indicador de la madurez y posible funcionalidad in vivo de las IG que codifican.