Bases moleculares de la resistencia a Polimixinas en Acinetobacter BaumanniiImplicaciones clínicas y epidemiológicas

Resumen

Acinetobacter baumannii se ha convertido en un importante patógeno oportunista en el medio hospitalario. La aparición de aislamientos clínicos extremadamente resistentes deja a la tigeciclina y polimixinas como potenciales alternativas. En el año 2002, se registró un brote nosocomial en el Hospital Universitario Virgen del Rocío (Sevilla) de A. baumannii resistente a todos los antimicrobianos disponibles incluyendo la colistina. Este hecho planteó los siguientes objetivos de la presente tesis: 1. Caracterización del brote nosocomial. 2. Evaluación del método E-test en la determinación de la CMI a colistina en comparación con el método de referencia de microdilución en caldo. 3. Estudio de la actividad de tigeciclina, minociclina e interacción tigeciclina-colistina. 4. Investigación de las bases moleculares así como de las potenciales modificaciones del lípido A relacionadas con una disminución de la sensibilidad a las polimixinas en la cepa salvaje A. baumannii ATCC 17978 y sus mutantes resistentes, así como en una colección de aislamientos clínicos de A. baumannii procedente de 5 países con diferentes CMI a poliximinas. Resultados: Se detectaron 19 aislamientos panrresistentes pertenecientes a un único clon. A pesar de la vigilancia activa y ambiental, no se pudo determinar la fuente del brote pero la instauración de diferentes medidas permitió su control. El método E-test fue útil en la categorización de aislamientos clínicos de A. baumannii, mostrando una concordancia de 98.2% con la técnica de referencia. Sin embargo, el método E-test presentó una tendencia a determinar valores más altos de CMI. Tigeciclina se mostró mucho más activa que minociclina, presentando una actividad similar tanto en los aislamientos sensibles como en los resistentes a colistina. El estudio de la interacción de colistina y tigeciclina frente a aislamientos de A. baumannii no demostró sinergia sino únicamente indiferencia. De todos los sistemas reguladores de dos componentes relacionados con la sensibilidad disminuida a las polimixinas en otras especies bacterianas, sólo el PmrA-PmrB obtuvo homología significativa en el genoma de A. baumannii ATCC 17978. La secuenciación del operón pmrCAB en las cepas mutantes y aislamientos clínicos resistentes demostró diferentes mutaciones y variantes. La deleción de cada uno de los genes del operón pmrCAB de la cepa salvaje no generó cambios significativos en la CMI a polimixina B, sugiriendo que este operón no contribuye de modo significativo a la resistencia intrínseca. La deleción de los genes pmrB o pmrC en cepas y aislamientos resistentes resultó en una disminución de dos o más diluciones de la CMI a polimixina B, sin cambios significativos en la sensibilidad al resto de antimicrobianos. La restauración de la resistencia a polimixina B se produjo por complementación con el plásmido portador del pmrAB de cepas resistentes (con una mutación en el pmrA o el pmrB), pero no con el plásmido vacío o con el pmrAB salvaje, demostrando así que esas mutaciones en cada uno de los genes conducen a la resistencia. El análisis de expresión genética demostró una correlación directa entre la expresión aumentada del gen pmrC y la resistencia a polimixina B. Los cambios detectados en el lípido A por cromatografía en capa fina se correlacionaron con la CMI a polimixina B. El análisis del lípido A por espectrometría de masas de la cepa resistente a polimixina B (R2) reveló cambios en la estructura comparada con su respectiva cepa parental ATCC 17978, consistentes en residuos de phosphoethanolamina. El análisis del aislamiento clínico C8 resistente a polimixinas reveló cambios similares. Conclusión: Se aportan evidencias de un mecanismo de resistencia a las polimixinas en A. baumannii. Este hecho puede conducir a una detección genotípica en la clínica, así como al diseño de nuevos antimicrobianos que superen este mecanismo de resistencia.