Estudio de las mutaciones somáticas en los genes IgVh3 de células plasmáticas humanas de diferentes territorios

Resumen

En este estudio se ha desarrollado un programa informático específicamente diseñado para facilitar los estudios sobre hipermutación somática (SHM), al que hemos denominado IgDSM(inmunoglobulin DNA somatic mutations). Con la ayuda de este programa se ha analizado la SHM en genes IgVh3 de células plasmáticas humanas, aisladas en sangre (CPsp) y en amígdala (Cpa), y en los isotipos IgG, IgA e IgM. Las conclusiones más importantes de este estudio son: - En CP de amígdala, el isotipo Ig A está claramente más mutado que IgG, y éste a su vez está más mutado que IgM. Estas diferencias hablan del distinto uso y papel funcional de los mismos en la respuesta humoral. Los datos de IgA parecen relacionar estas CP con un comportamiento funcional de depósito submucoso. - En CP de sangre periférica las diferencias mutacionales entre isotipos están más atenuadas que en amígdala, si bien se sigue observando mayor cantidad de mutaciones totales en secuencia IgG que en IgM. No hay diferencias apreciables entre IgG e IgA. -La comparacióin de SHM entre CP de amígdala y de sangre revela la existencia de una clara selección de las poblaciones circulantes, en el sentido de mayores cantidades de mutaciones en las secuencias IgM e IgG. Esto implica la existencia de jerarqías funcionales entre diferentes territorios. Por el contrario, no se observan diferencias entre las secuencias IgA de ambos territorios. -El análisis del efecto cuantitativo de la SHM revela que el aumento del número total de mutacion es induce una acumulación de mutaciones R hasta un determinado umbral, por encima del cual aumentos sucecisovos no implican incremento del ratio R/S. La velocidad con que se alcanza este umbral de R/S no es homogénea, lo que puede deberse a diferencias en el requerimiento para la afinidad por el Ag. -La región más mutada de los genes IgVh3 es CDR1, tanto en Cpa como en CPsp. A pesar de este dato, la diferencia entre la mutabilidad observada y la mutabilidad intrín seca teórica en esta región es mayor que en CDR2, que presenta mayores valores de R/S.Estos datos indican que los ccambios en CDR1 están especialmente limitados por la selección antigénica. -Los patrones de distribución de los nucleótidos sustituidos no dependen del territorio (sangre o agmídala), isotipo o número total de mutaciones. -La distribución de uso de los segmentos Jh no depende del territorio o del isotipo. -Existen diferencias en la distribución del uso de los segmentos D y de la longitud de CDR3 entre territorios. La menor longitud del CDR3 en sangre sería consistente con la idea de que el acortamiento de este segmento se asocia a mayor madurez. -Existen sesgos en el uso de los 22 miembros de Vh3 para los reagrupamientos Vh3-D-J, con diferencias entre regiones e isotipos, pero en todo caso el miembro más utilizado es Vh3-23