El factor materno vasa como marcador molecular para la caracterización de las células germinales/gc en dos especies de peces planosel lenguado senegalés (Solea senegalensis) y el rodaballo (Scophthalmus maximus). Aplicaciones biotecnológicas en acuicultura

Resumen

Los trasplantes heterólogos de células germinales han generado una notable innovación biotecnológica en el campo de la reproducción de teleósteos, tanto en el ámbito de la acuicultura como en la conservación de los recursos genéticos. Estas técnicas pueden permitir la reproducción de especies cuya domesticación está desfavorecida por alguna disfunción reproductiva o por otros factores como por ejemplo el gran tamaño que alcanzan los reproductores de algunas especies de teleósteos y la dificultad en mantenerlos en cautividad. El potencial biotecnológico de los transplantes heterólogos ha sido objeto de este estudio en dos especies de peces planos: el lenguado Senegalés, Solea senegalensis, especie cuyo ciclo reproductivo todavía no se ha cerrado, y el rodaballo, Scophthalmus maximus, especie cuya reproducción en cautividad se estandardizó en los años noventa. En este trabajo, para el desarrollo de los trasplantes inter-específicos entre el lenguado Senegalés (especie donante) y el rodaballo (especie receptora), se han planteado tres pasos para el establecimiento de este procedimiento. En la primera fase, se ha llevado a cabo la caracterización, en ambas especies, del gen vasa, un marcador molecular específico de células germinales. Para ello los productos de este gen (ARNm Ssvasa y Smvasa y proteínas codificadas) se han caracterizado mediante clonaje génico (cDNA cloning), PCR cuantitativa (q-PCR), hibridación in situ (ISH) y detección inmunohistoquímica (IHC) (Capítulos 1 y 2). En la segunda fase se han determinado los procedimientos para la realización de los trasplantes de células germinales testiculares del lenguado Senegalés (TGCs) en larvas de rodaballo y para ello se han establecido: 1) métodos de extracción de TGCs a partir de juveniles de lenguado Senegalés de un año de edad ; 2) métodos de evaluación de la viabilidad de las TGCs extraídas; 3) o el estadio de desarrollo larvario más apropiado para realizar el trasplante en la especie receptora. En este estudio el ARNm Ssvasa ha permitido detectar la proliferación de las células germinales del lenguado Senegalés en rodaballo mediante q-PCR (Capítulo 3). Estudios recientes en especies de teleósteos demostraron la importancia de los métodos químicos en la esterilización de los peces receptores empleados en los trasplantes inter-específicos, por ello, en la el tercera fase de este trabajo se ha investigado el potencial de los tratamientos con busulfan para la producción de la esterilidad en peces planos utilizando el lenguado Senegalés como especie modelo. La detección de los ARNm Ssvasa ha permitido identificar el efecto de busulfan en las células germinales en los peces tratados (Capítulo 4).