Estudio de la secrecion de inmunoglobulinas en celulas plasmaticas humanas

Résumé

Las células plasmáticas juegan un papel crítico en la inmunidad adaptativa como mediadores de la respuesta inmune humoral. Estas células son linfocitos-B diferenciados con la única finalidad de secretar inmunoglobulinas o anticuerpos. A pesar de la importancia de este proceso, no se ha estudiado aún que mecanismos podrían estar implicados en la exocitosis de inmunoglobulinas. Por otra parte, se conoce que las proteinas SNARes (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptors) median los procesos de fusión de membranas en la célula y se han asociado a procesos de exocitosis en diversos sistemas, por lo que nos planteamos en este trabajo si estas proteinas estarían involucradas en la exocitosis de anticuerpos. Para el estudio usamos células plasmáticas humanas normales obtenidas de lámina propia de colon y sangre periférica; y tumorales, en este caso las lineas celulares IM-9 y U266. Mediante ensayos de detección de transcritos primarios (RT-PCR y Protección de ARNasas) y proteinas ("Western-blotting", Inmunofluorescencia y subfraccionamientos celulares) identificamos en las células a estudio las proteinas SNAREs, VAMP-2, VAMP-3, VAMP-4, VAMP-5, VAMP-8, SNAP-23, Sintaxina-2, Sintaxina-3, Sintaxina-4, proteinas que se han descrito preferentemente en procesos de exocitosis en otros sistemas. Las proteinas VAMP-1, SNAP-25 y Sintaxina-1 no se detectan., las cuales son más específicas de tejidos neuronales y neuroendocrinos. Cuando transfectamos las células plasmáticas con proteinas de fusión GST-SNAP-23(1-203) observamos una inhibición de la secreción de inmunoglobulinas. Sin embargo, con la transfección de GST o la forma delecionada GST-SNAP-23(1-150) (delección de unión a otros SNAREs) no se veia afectada la secreción. Estos datos sugieren que la proteína SNAP-23 parece estar implicada en la secreción de inmunoglobulinas, y las proteinas de fusión para SNAP-23 estarían uniéndose a proteínas SNAREs dianas endógenas, dando lugar a interacciones no productivas, por lo que estarían actuando como péptidos inhibitorios y bloqueando así la exocitosis de anticuerpos.