Estudio del ciclo reproductivo de peces teleósteos en el Golfo de Cadizcaracterización de las gonadotropinas de Thunnus thynnus y esteroidogénesis en el ovario de Fundulus heteroclitus

Resumen

Las gonadotropinas son las hormonas que regulan la esteroidogenesis y la gametogenesis. En la presente memoria se han purificado y caracterizado las gonadotropinas de un pez teleosteo, thunnus thynnus, para lo que se han empleado diferentes tecnicas electroforeticas y cromatograficas. Se realizo una cromatografia de afinidad en concanavalinaa-sefarosa a partir de la que se obtuvieron dos fracciones, rica y pobre en carbohidratos. La fraccion rica en carbohidratos, cona-ii resulto mas potente al estimular la sintesis y secrecion de estradiol en foliculos ovaricos vitelogenicos de fundulus heteroclitus y mas inmunorreactiva frente a anticuerpos anti gth-heterologos. Asimismo, a partir de cona-ii, mediante electroforesis semipreparativa en geles de poliacrilamida se obtuvieron dos fracciones a las que se denomino gth i y gth ii con pesos moleculares aparentes de 35 y 30 kmr respectivamente. La tecnica del isolectroenfoque aplicada a ambas fracciones evidencio puntos isoelectricos de 6 y 5.5 para gth i y gth ii respectivamente. Ambas fracciones estimularon la sintesis y secrecion de estradiol en foliculos vitelogenicos de f. Heteroclitus en ensayos in vitro, presentando respuestas diferentes y variables segun el momento del ciclo. Asi, gth i resulto mas potente durante la fase de vitelogenesis y postpuesta-recuperacion y gth ii durante la fase de maduracion-puesta. Ambas gths resultaron ser heterodimericas compartiendo una subunidad alfa de 12 kmr y con subunidades beta de 19 y 16 kmr respectivamente. Tanto las gths como sus subunidades resultaron inmunorreactivas frente a anticuerpos anti-gths heterologos. La desglicosilacion de ambas gths altero su bioactividad y pi, calculandose un porcentaje aparente de azucares del 50%. Las caracteristicas de las gths obtenidas para thunnus thynnus son coherentes con las descritas para otros teleosteos, tanto su rango de peso, punto isoelectrico y porcentaje de azucares, asi como su actividad