Desarrollo de nuevas metodologías para la enumeración de células en cultivo y la cuantificación de la apoptosis

Résumé

Los estándares internos han sido utilizados en métodos de citometría de fuljo para enumerar subpoblaciones linfoides y progenitores hematopoieticos ex vivo. Sin embargo, los métodos actualmente disponibles no pueden ser realmente aplicados al análisis de células cultivadas debido a la existencia de muerte celular durante ensayos, in vitro. Materiales y Métodos: Esta tesis propone un nuevo método para la enumeración de células viables y no viables y de células proliferantes y no proliferantes en cultivo. Las células fueron cuantificadas mediante un estándar interno de referencia de micropartículas y la discriminación entre células viables y no viables se realizó mediante el marcaje doble con anexina V y 7- aminoactinomicina que permite el marcaje doble de antígenos de superficie. .Resultados: El método es más preciso, exacto y sensible que la microscopía óptica convencional y los contadores celulares automáticos. Además, puede ser utilizado para medir exactamente el numero de células apoptóticas en un cultivo celular heterogéneo. Conclusiones: El método de enumeración celular ratiométrico por citometría de flujo desarrollado en esta tesis es más exacto, preciso y sensible que la microscopia óptica convencional y los contadores celulares automáticos y permite la definición del inmunofenotipo de las poblaciones celulares en un cultivocelular heterogéneo.