Células madre mesenquimales derivadas del líquido amniótico humanociclo de vida y criopreservación

Resumen

l proyecto de tesis doctoral ha evaluado el potencialidad para su uso en medicina regenerativa de las células madre mesenquimales aisladas del líquido amniótico humano para ello I proyecto se estructuro en tres fases. Primera fase: estudio general de las poblaciones de células viables adherentes aislables del líquido amniótico humano. Determinación de características morfológicas, fenotípicas de superficie e intracelulares y del potencial de diferenciación hacía los linajes adipogénico, condrogénico y osteogénico. Segunda fase: determinación del ciclo de vida de las células madre mesenquimales del líquido amniótico humano, longevidad y alteraciones en sus características biológicas. Se determinó que este tipo poblacional muestra una longevidad media superior a los 7 meses con unos rendimientos celulares muy superiores a los observados por otros autores en poblaciones mesenquimales aisladas de médula ósea, cordón umbilical o tejido adiposo. Durante el ciclo vital, se observaron alteraciones morfológicas en pases tardíos asociables a la entrada en senescencia de los cultivos. Dicha entrada en senescencia no se vio acompañada de alteraciones en la dotación cromosómica, las cuales se asocian con la transformación expontánea de los cultivos. Las células mantuvieron durante todo su ciclo vital la naturaleza mesenquimal aunque pudimos detectar alteraciones en el conjunto de marcadores embrionarios detectados. Dichas alteraciones fueron relacionadas con un proceso de transición evolutiva de la población desde una estadio mesenquima-embrionario hacia uno netamente mesenquimal. Además de mantener su fenotipo mesenquimal durante todo su ciclo vital, las células madre del líquido amniótico presentaron potencialidad para diferenciarse hacia los linajes adipogénico, condrogénico y osteogénico hasta el total agotamiento de los cultivos. Como último parámetro evaluado se realizó un análisis génico mediante teconología de mícroarray de los patrones de expresión de mRNAs y de miRNAs. Se detectaron 17 genes significativos en el análisis de mRNAs y 12 miRNAs significativos en el análisis de patrones de miRNAs. Las funciones biológicas de estos genes y miRNAs significativos estaban fundamentalmente relacionadas con la proliferación, debidas fundamentalmente a los genes TP53 CDKN2D y al hsa-miR-125a, y con la proliferación, debida fundamentalmente a los genes SERPINH1 y COL5A2. Tercera fase: una vez evaluada la longevidad de las células madre mesenquimales del liquido amniótico humano y analizados los cambios morfológicos, cariotípicos, fenotípicos, génicos y de potencial de díefernciación, se analizó el impacto de la criopreservación sobre su biología y naturaleza. Ninguno de los parámetros analizados mostró diferencias estadísticamente significativas respecto a las muestras no crioconservadas y fundamentalmente se detectaron valores de supervivencia (viabilidad y apoptosis) y de ciclo celular (fases G,, S y G2) muy semejenates, la naturaleza mesenquimal de las células tampoco se vio alterada con un fenotipo y capacidad de diferenciación estables.