Manipulación genética del hongo fitopatógeno Botrytis cinerreaclonación del gen adha

Resumen

Debido a la importancia de los daños causados por Botrytis cinerea, así como a su amplia distribución y elevado número de cultivos que afecta, se han realizado numerosos estudios fisiológicos, bioquímicos, epidemiológicos, genéticos, etc., con el fin de conocer los distintos mecanismos que el hongo desarrolla durante el proceso infectivo. Muchas técnicas de Biología Molecular se han aplicado desde 1980 en este fitopatógeno, encaminadas en su gran mayoría, al estudio de enzimas que puedan intervenir en el ataque a su huésped tales como cutinasas, pectinasas, catalasas, o la producción de diversos metabolitos, o bien dedicados al estudio de la variabilidad genética presente entre las distintas poblaciones. Sin embargo, y a pesar de todos estos trabajos no se conocen aspectos fundamentales del hongo como el control y los mecanismos de patogenicidad, la base molecular de las resistencias a fungicidas, etc. El presente trabajo recoge un sistema de transformación desarrollado en Botrytis cinerea, mediante la utilización de dos tipos de vectores, uno de carácter integrativo (pUT737) y otro de carácter autónomo (pAMPF21). La transformación de un hongo como Botrytis es una herramienta poderosa que permite entender como se expresa el genoma fúngico, y como controlan los genes, todas las actividades biológicas. La utilización del vector pUT737 ha revelado la presencia del plásmido libre en la célula receptora.La estabilización del plásmido se produce como consecuencia de reordenaciones a través de recombinación in vivo. La utilización de vector pAMPF21, el cual porta la región AMA1 que confiere capacidad de replicación autónoma el hongo tales como Penicillium, Aspergillus, pero no en otros como Acremonium, confirma que dicha región también permite la replicación independiente en este hongo sin necesidad de ningún tipo de reorganización. La segunda parte del trabajo recoge la clonación de un gen implicad