Detección, clonación y caracterización de genes expresados diferencialmente en glucosa o lactosa en "Penicillium chrysogenum"

Resumen

Las diferentes técnicas para la determinación de diferencias en la expresión génica entre dos tipos de células, o dos condiciones diferentes en que se desarrollan las células, constituyen en la actualidad una herramienta de importancia fundamental para dilucidar muchos aspectos importantes de la biología molecular de los organismos, en particular en aspectos relacinados con la regulación temporal y espacial de diferentes grupos de genes que funcionan de forma coordinada para desarrollar distintas funciones celulares. Con el fin de obtener un conocimiento más amplio del metabolismo primario de Penicillium chrysogenum, además de tratar de encontrar genes que pudieran tener influencia sobre la biosíntesis de penicilina, bien por regular directamente los genes de la ruta o bien por cualquier otro mecanismo indirecto, se clonaron y caracterizaron clones de ADNc obtenidos de células P. chrysogenum NRRL 1951 (cepa silvestre) crecidas en medios con glucosa (fuente represora de la biosíntesis de penicilina) o lactosa (fuente no represora) como fuentes de carbono. Para ello se utilizó la técnica de substracción de ADN y selección por PCR (kit PCR-Select TM cDNA Substraction de la casa comercial Clontech). De los clones caracterizados, 55 presentaron identidad con diferentes proteínas conocidas en las bases de datos utilizadas, mientras que 92 no presentaron identidad significativa con ninguna proteína ya caracterizada. El análisis de los clones condujo a la caracterización de varios genes no identificados aún en P. chrysogenum. Algunos de los clones obtenidos y que presentan una expresión diferencial drástica están involucrados en la respiración. El análisis y caracterización completos de estos genes podría contribuir a elucidar mecanismos regulares o rutas de transducción de señales involucradas en la generación de energía en P. chrysogenum. En resumen, en este trabajo se analizó una pequeña parte del genom