Estudio del sistema inmune innato y adaptativo en urta (Pagrus auriga)
- Martín Antonio, Araceli Beatriz
- Manuel Manchado Campaña Director
- Laureana Rebordinos González Director
Defence university: Universidad de Cádiz
Fecha de defensa: 08 July 2009
- Juan José Borrego García Chair
- Jesús Manuel Cantoral Fernández Secretary
- Carlos Infante Toscano Committee member
- Catalina Fernández Díaz Committee member
- Jose Ignacio Navas Triano Committee member
Type: Thesis
Abstract
En esta tesis se estudia el sistema inmune de la urta (Pagrus auriga), dividiendo su estudio en dos partes, el sistema inmune innato (SII) y en el sistema inmune adaptativo (SIA). Para el estudio del SII, mediante la técnica de hibridación sustractiva supresiva (SSH) se obtuvieron tras inducción con LPS (estímulo bacteriano) ESTs correspondientes a genes expresados diferencialmente debido a este tratamiento. De estos genes obtenidos, se llevó a cabo una selección de 4 relacionados con la respuesta del SII para obtener sus secuencias completas, determinando los elementos conservados y característicos de cada familia y se procedió a estudiar mediante PCR a tiempo real su expresión durante la ontogenia de P. auriga, su expresión en los distintos órganos de individuos juveniles y su inducción tras tratamiento con LPS y la bacteria Photobacterium damselae subsp damselae en riñón cefálico analizando la variación temporal de la inducción desde la hora a las 48 horas tras el estímulo. En un experimento similar se estudió igualmente la inducción tras LPS a las 3 horas en riñón cefálico, hígado y bazo. Los genes seleccionados para este estudio fueron: la hepcidina, una quimioquina CXC, el factor inhibidor de la migración de macrófagos (MIF), y el factor regulador de interferón 1 (IRF-1). Respecto al estudio del SIA, se llevó a cabo la producción de un anticuerpo policlonal contra Ig de P. auriga para su uso en inmunoensayos, para ello se obtuvo y caracterizó la IgM de P. auriga, y mediante Western Blot y ELISA se mostró la reactividad y especificidad del antisuero obtenido en suero de urta e Ig purificada. Mediante citometría de flujo se determinaron las poblaciones leucocitarias reconocidas por el antisuero en riñón cefálico, mostrándose también en otros tejidos inmunes (bazo, intestino, branquias y riñón cefalico) el % de células portadoras de Ig que reconocía el antisuero. Se determinó mediante Western Blot y ELISA la reactividad cruzada del antisuero en otras especies de peces y por último se mostró la aplicabilidad del antisuero obtenido para ver la respuesta tras vacunación en individuos P. auriga y en otras especies de peces vacunados con patógenos bacterianos.