Optimización y validación de un método de análisis de compuestos fenólicos en uvas mediante cromatografía líquida de ultra-eficacia (uHPLC-DAD-FL)”

Resumen

La uva (Vitis vinífera L.), es una de las frutas con mayor producción a nivel mundial. Uno de los motivos de su creciente interés es la actual concienciación de los consumidores por incluir alimentos saludables en sus dietas. La uva cruda y los productos elaborados a partir de ella(vinos, zumos, concentrados…), proporcionan múltiples beneficios a la salud, principalmente asociados a su fuerte actividad antioxidante. Los compuestos antioxidantes mayoritarios en la uva son los compuestos polifenólicos. Estos compuestos, además de proteger a la propia uva,ayudan tras su ingestión a combatir los radicales libres en las células y tejidos humanos [1]. Por ello, el conocimiento sobre la composición fenólica de las uvas y sus derivados es un gran desafío en la actualidad, y supone un gran interés tanto a nivel de salud de los consumidorescomo de calidad de la materia prima y sus productos. Por un lado, su consumo reduce la probabilidad de desarrollar enfermedades crónicas, como enfermedades cardíaca, diabetes y cáncer [2]. Por otro lado, los polifenoles son uno de los parámetros de calidad más importantes en los vinos debido a su influencia en propiedades sensoriales, como el color, la estabilidad, el amargor y la astringencia. La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) ha sido la técnica más empleada en los últimos años para el análisis de polifenoles en matrices naturales. En este trabajo, se propone como alternativa el empleo de la cromatografía líquida de ultra-eficacia (UHPLC). La UHPLC incorpora rellenos de partículas de diámetros inferiores a 2 µm y altas presiones (hasta10 8 Pa), proporcionando así separaciones en un menor tiempo, mayor resolución y sensibilidad. Concretamente, se ha desarrollado un método cromatográfico para la determinación y cuantificación de 27 de los principales compuestos fenólicos presentes en la uva mediante detección DAD y Fluorescencia. La separación de los 27 compuestos se logró en menos de 9 minutos. Los compuestos analizados han sido: ácido gálico, ácido protocatéquico, ácido clorogénico, ácido vainíllico, ácido cafeico, ácido siríngico, ácido pcumárico, ácido ferúlico, ácido p-hidroxibenzoico, ácido caftárico, miricetina, rutina, quercetina 3-rhamnósido, quercetina 3-glucósido, quercetina 3-galactósido, kaempferol, quercetina, catequina, epicatequina (EC), epicatequina galato (ECG), epigalocatequina galato (EGCG), trans-resveratrol, ε-viniferina, trans-piceido, procianidina B1, procianidina B2 y procianidina A1. El método fue validado mediante el estudio de la linealidad, límites de detección y cuantificación, precisión, selectividad y robustez. Finalmente, el método desarrollado se aplicó en el análisis de muestras de uvas de vinificación, de mesa y silvestres.